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DiI是最常用的细胞膜荧光探针之一，呈现橙红色荧光。染料DiI,DiD,DiO和DiR是一类亲脂性荧光染料家族，用于标记细胞膜和疏水性组织。这是一类环境敏感型荧光染料，当它们与膜结合或者与亲脂性生物分子(例如蛋白质，虽然在水中其荧光强度很弱)结合时，其荧光强度显著增强。它们具有很高的淬灭系数，偏光依赖性和很短的激发寿命。一旦应用于细胞中，这种染料会在细胞内质膜中逐步扩散，导致在其最佳浓度条件下，将整个细胞膜染色。它们不同的荧光颜色：DiI(橙红色荧光)、DiO(绿色荧光)、DiD(红色荧光)、DiR(深红色荧光)，为活细胞多色彩荧光成像分析和流式细胞术提供了一种便捷的工具。DiI可以用标准的TRITC滤光片检测。

DiI通常不会影响细胞的生存力因此被广泛用于正向或逆向，活的或固定的神经等细胞或组织的示踪剂或长期示踪剂(long-term tracer)。被DiI标记的神经细胞在体外培养的条件下可以存活长达4周，在体内可以长达一年。DiI在被固定的神经元细胞膜上的迁移速率为0.2～0.6mm/day，在活的神经元细胞膜上的的迁移速率为6mm/day。

DiI除了用于细胞膜荧光标记外，还可用于检测细胞的融合和粘附，检测发育或移植过程中细胞的迁移，通过FRAP检测脂在细胞膜上的扩散，检测细胞毒性和标记脂蛋白等。

英文名称	1,1'-dioctadecyl-3,3,3',3'tetramethylindocarbocyanine perchlorate
其他名称	DiIC18(3)
CAS号	41085-99-8
分子式	C59H97ClN2O4
分子量	933.88
结构式
光谱特性	Ex/Em=550nm/567nm
外观	红色至暗红色，紫色至深紫色粉末
溶解性	溶于无水乙醇、DMSO和DMF
储存条件	-20℃，避光防潮密闭干燥

• 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
  
• DiI染色固定的细胞或组织样品时，样品宜使用配制在PBS中的4%多聚甲醛进行固定，使用其它不适当的固定液会导致荧光背景较高。
  
• 为了您的安全和健康，操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。
  
• 我司产品为非无菌包装，若用于细胞培养，请提前做预处理，除去热原细菌，否则会导致染菌。

	1mg	5mg	10mg
1mM	1.071mL	5.354mL	10.708mL
5mM	214.163μL	1.071mL	2.142mL
10mM	107.081μL	535.406μL	1.071mL

• 染色液制备
  
  • 配置DMSO或EtOH储存液：储存液用DMSO或EtOH配置浓度1～5mM。
    注：未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融。
    
  • 工作液制备：用合适的缓冲液(如：无血清培养基，HBSS或PBS)稀释储存液，配制浓度为1～5μM的工作液。
    注：工作液最终浓度建议根据不同细胞系和实验体系来优化。建议从推荐浓度的10倍范围内开始最优浓度的摸索。
• 悬浮细胞染色
  
  • 加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为1×10⁶/mL。
    
  • 37℃孵育细胞2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。
    
  • 孵育结束，按1000～1500rpm离心5min。
    
  • 倾倒上清液，再次缓慢加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。
    
  • 重复步骤3、4两次以上。
• 贴壁细胞的染色
  
  • 将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。
    
  • 从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，将盖玻片放在潮湿的环境中。
    
  • 在盖玻片的一角加入100μL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
    
  • 37℃孵育细胞2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。
    
  • 吸干染料工作液，用培养液洗盖玻片2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育5～10min，然后吸干培养基。
• 显微镜检测
  DiI，DiD，DiO，DiR滤光器的选择参见表1。DiD染色可见红色荧光。
  
• 流式细胞仪检测
  DiO、DiI、DiD、DiR染色的细胞可以分别用经典的FL1，FL2，FL3和FL4流式细胞仪检测。